生物指示剂D值在灭菌验证时要测定么？

  生物指示剂是一种对特定灭菌程序有确定及稳定耐受性的特殊活微生物制成品，可用于灭菌设备的性能确认，特定物品的灭菌工艺研发、建立、验证，生产过程灭菌效果的监控，也可用于隔离系统和无菌洁净室除菌效果的验证评估等。

  D值即在规定灭菌温度下（如121℃），将生物指示剂产品中耐热微生物杀灭90%（下降一个对数单位）所需的时间。D值越大，耐热微生物杀灭速度越慢，该菌株的耐热性越强。

灭菌验证一定要测定待灭菌产品中生物指示剂的D值吗？

  根据《化学药品注射剂灭菌和无菌工艺研究及验证指导原则（试行）》要求，“针对具体的灭菌工艺和具体的产品，还应注意所用的生物指示剂的耐受性应强于待灭菌产品中的污染菌"。“由于生物指示剂在不同介质或环境中的耐受性会有所不同，所以无论是将生物指示剂接种到待灭菌产品的方法，或直接使用市售的生物指示剂成品，均应考虑待灭菌产品对细菌芽孢耐受性的影响，如果待灭菌产品会使芽孢的耐受性增加，应采用直接接种到待灭菌产品的方法。如果生物指示剂与产品不相容，可以用与产品相似的溶液来代替产品。使用市售生物指示剂时，应确保生物指示剂的 DT值和总芽孢数等主要质量参数的准确性"。

  根据20版中国药典附录《9207灭菌用生物指示剂指导原则》要求，“生物指示剂的初始微生物的数量、耐受性(菌体耐受性)和放置的位置、方式等情况都会影响其灭活效果。在湿热灭菌工艺中，生物指示剂的使用是通过生物学的方法来验证其灭菌效果，只要D值足够，即使初始微生物数量低于100000，使用生物指示剂仍然可以验证其灭菌效果。对湿热灭菌耐受性差的物品，其无菌保证应通过比较生物指示剂与物品灭菌前微生物的污染水平(耐受性及微生物污染数量)及灭菌程序验证所获得的数据进行评估"。

  再次，从灭菌验证的操作过程来看，不同的暴露时间、放置区域、指示剂类型（载体型、芽孢悬液型、自含型）、芽孢菌种（如嗜热脂肪地芽孢杆菌，生孢梭菌、枯草芽孢杆菌等）、指示剂纯度和均匀性、培养基等均会影响灭菌后存活孢子计数结果的准确性。实验操作：产品在121℃下灭菌，设计不同的暴露时间(如8min\12min\14min等)，覆盖全部阳性反应、全部阴性反应和部分阳性、阴性反应的区间（如热点、冷点区域等）。每个暴露时间点所用的待测生物指示剂样品为20支，每次暴露的样品批次和数量相同。每次暴露程序完成后，立即按压玻璃管，使培养基与含菌纸片充分接触，55℃培养48h，记录阳性/阴性反应。计算存活孢子计数结果。

  微生物到底在什么样的介质中耐受性会增加？根据经验，介质成分和pH值等均会影响微生物的耐受性，如某些酵母菌在pH值4-5时耐热性增加，有些芽孢在低浓度盐溶液中、高浓度的糖溶液中，耐热性增加。

  从上可知，由于生物指示剂在不同介质或环境中的耐受性会有所不同，因此选择生物指示剂时，需要考虑应考虑待灭菌产品对细菌芽孢耐受性的影响。如测定生物指示剂中芽孢在待灭菌产品中的D值，如果耐热性增加，则需直接接种到待灭菌产品的方法进行验证。这在一些盐类产品中特别需要注意。